Hva er spektrofotometer Absorbance?

November 7  by Eliza

Spektrofotometrisk absorbans refererer til mengden av lys som absorberes av en oppløsning, som målt ved hjelp av en laboratorie-instrument som kalles en absorbans spektrofotometer. I kjemi og biologi, er spektrofotometere som brukes for en rekke formål. De kan bidra til å identifisere forbindelser, bestemme konsentrasjoner av oppløsninger, eller anslå antallet av celler suspendert i en væske. Spektrofotometre arbeider ved å rette en filtrert sett av visse bølgelengder av lys gjennom en prøveoppløsning og inn på en lysmåler. Mengden av lys som overføres eller absorberes av prøven, samt bølgelengder absorberes, avslører noen av prøvens egenskaper.

Lyset som mennesker oppfatter visuelt er en form for energi, elektromagnetisk stråling, og omfatter et område av bølgelengder over en liten del av det elektromagnetiske spektrum. Gammastråler, røntgenstråler og andre korte bølgelengder i henhold til 400 nanometer (nm) er ikke synlig for det menneskelige øye, og heller ikke er bølgelengder lengre enn 700 nm, for eksempel infrarødt lys eller radiobølger. Fargene som mennesker oppfatter spenner fra kortere blå og fiolette bølger rundt 400 nm gjennom regnbuen til rødt, som er nærmere 700 nm. Spektrofotometre måle i det synlige området med noen lapper inn de ultrafiolette og infrarøde delene av spekteret.

Når vi ser en farge, for eksempel et grønt blad, vi ser lys bølgelengder som blir overført av dette elementet. I tilfellet med den grønne blad, en forbindelse i plantens celler som kalles klorofyll absorberer blå og røde bølgelengder fra det hvite lyset fra solen, men er ikke sterkt absorberende greenen. I stedet blir de grønne og nær-grønne bølgelengder blir overført, og anlegget vises grønt.

I en hvilken som helst gitt væskeløsning, vil noen bølgelengder av lys absorberes i større mengder enn andre. Spektrofotometre regissere en stråle av hvitt lys gjennom prøveløsningen som studeres. Den spektrofotometrisk absorbans er mengden av lys som absorberes av forbindelsen som ble undersøkt. Dette lyset blir absorbert i varierende mengder over et område av bølgelengder som er kjent som absorpsjonsspekteret.

Absorpsjonsspekteret kan bidra til å identifisere prøveforbindelsen. For eksempel, noen plantepigmenter absorberer forskjellige bølgelengder enn klorofyll og kan skilles fra hverandre ved deres absorpsjon eiendommer - grafer der spektrofotometer absorbans vises som en funksjon av bølgelengde. Bølgelengdene som er absorbert i det høyeste beløpet vil fremstå som pigger på grafen, noe som gir hver forbindelse grafen en karakteristisk form.

Konsentrasjonen av oppløsningen kan også utledes fra dens spektrofotometrisk absorbans. Dette gjøres gjennom den Lambert-Beer lov, også kjent som Beer 's lov, som er en ligning som gjelder nivået av spektrofotometrisk absorbans for konsentrasjon gjennom to andre faktorer: ekstinksjonskoeffisienten og banelengden, eller bredden av prøverøret. Ekstinksjonskoeffisienten er en kjemisk faktor som er forskjellig for hver forbindelse, men det kan bestemmes ved testing av en prøve av kjent konsentrasjon i spektrofotometeret. Beer 's lov kan deretter brukes til å løse med hensyn på ukjente konsentrasjoner av den samme forbindelse.

  • Elektromagnetisk stråling omfatter et område av bølgelengder over en liten del av det elektromagnetiske spektrum.