Hva Er ELISA-metoden?

April 2  by Eliza

ELISA-metoden er en test som blir brukt i immunologi og andre vitenskapelige områder for å påvise antistoffer og antigener. ELISA står for enzymbundet immunosorbent assay, som refererer til det faktum at antistoffer koblet til enzymer som er benyttet for å bestemme resultatene av testen. ELISA-metoden er brukt i medisin for å påvise antistoffer mot sykdommer som en diagnostisk mål, og er en vanlig teknikk som brukes i immunologisk og biokjemisk forskning.

ELISA-testen ble utviklet i 1960 og 1970 som en erstatning for immunologiske tester som involverte bruk av radioaktive antistoffer og antigener. Risikoen ved bruk av radioaktive materialer laget testing prosessen tungvint usikre, og framveksten av ELISA-metoden løste begge disse problemene. I stedet for ved hjelp av radioaktive materialer for å bestemme resultatene av en test, bruker ELISA enzymer som reagerer med antistoffer for å danne fargede produkter. Utvikling av farge i en ELISA-test indikerer et positivt resultat.

Det finnes flere forskjellige typer av ELISA-tester. Den mest vanlig brukte ELISA-metoden kalles den indirekte ELISA, og dette er et antistoff test benyttet for å bestemme hvorvidt en bestemt type antistoff er til stede i en prøve, og til hvilken konsentrasjon. I diagnostisk medisin, denne testen brukes for å påvise tilstedeværelse av antistoffer mot infeksiøse sykdommer så som HIV, hepatitt og andre. Tilstedeværelsen av antistoffer mot disse sykdommene indikerer at individet som blir testet har vært utsatt for de infeksiøse midler. Vanligvis prøven som brukes er av en patientâ € ™ s blod.

I denne testen blir et spesifikt antigen-protein som brukes til å belegge en mikrotiterplate. Dette lille, plastplate har 96 små brønner, og en enkel ELISA-test kan bli utført i hver brønn. Antigenet som brukes for en gitt prøve er avhengig av typen av antistoff testen prøver å detektere. For eksempel, hvis ELISA anvendes for en HIV-test, vil antigenet som brukes er spesifikke for dette viruset.

Som test skrider frem, blir små mengder av den ukjente prøve tilsatt til hver brønn i mikrotiterplate, og platen inkuberes for å tillate tid for antistoffer i prøven å binde seg til antigenet. Deretter blir et sekundært deteksjonsantistoff tilsatt til hver brønn på platen. Dersom prøven inneholder en hvilken som helst av antistofftype som blir testet for, vil det bindes til det sekundære antistoff deteksjon under den påfølgende inkubasjonsperioden.

Nøkkelen til ELISA-metoden er at det sekundære antistoff er merket med en bestemt type enzym. Enzymet som benyttes er i stand til å endre fargen av forsøksprøven når den reagerer med dets substrat. Derfor, hvis en prøve inneholder noe av antistoffet som testes etter, tilsetning av substratet til en brønn vil få den til å endre farge, på grunn av tilstedeværelsen av det sekundære antistoff og dens tilhørende enzym.

Det finnes også andre varianter av ELISA-metoden, blant annet en test som kalles sandwich ELISA. Dette brukes til å påvise antigener i en prøve, i stedet for antistoffene. I denne testen blir den mikrotiterplate belagt med en standardisert prøve av antistoff. Deretter ble antigenet testprøven tilsatt, etterfulgt av tilsetning av det sekundære antistoff deteksjon og tilhørende enzym. Som med den indirekte ELISA, dannelse av et farget produkt indikerer et positivt resultat.

  • Blodprøver areanalyzed å identifisere spesifikke proteiner og deres konsentrasjoner ved ELISA-metoden.