Hva er en FITC antistoff?

November 20  by Eliza

En fluorescein isotiocyanat-konjugert (FITC) antistoff er et fluorescerende molekylær markør meget spesifikt for enten et bestemt protein eller et primært antistoff. De blir brukt til å identifisere proteiner i immunocytokjemi, enzym og protein aktivitetsanalyser, flowcytometri, og Western blotting. De fleste FITC antistoffer kan kjøpes gjennom spesialiserte molekylærbiologi selskaper eller gjort av private forskningslaboratorier.

FITC er et fluorokrom ofte konjugert eller knyttes til et antistoff for å foreta en bestemt, fluoriserende markør. Når de utsettes for elektromagnetisk energi ved en bestemt bølgelengde, fluorokromer er kjemikalier som vil absorbere den energi og avgir et foton med en bestemt bølgelengde. FITC absorberer energi ved 495 nm og avgir et foton på 521 nm. Hver fluorokrom har forskjellig absorpsjon og emisjon område, slik at for systematisk deteksjon av mange fluorchrome bundne antistoffer i ett stykke vev eller prøve. Dette ligner på merking av ulike deler av en celle med forskjellige farger og deretter ved hjelp av spesialiserte briller for å se på bare én farge om gangen.

Antistoffer kan bindes, eller konjugert til FITC-molekylet for å frembringe et FITC-antistoff. Det FITC-antistoff kan brukes til å direkte eller indirekte merke et protein. Når et FITC antistoff etiketter et protein direkte, den fungerer som det primære antistoff, eller et antistoff som er i direkte kontakt med antigenet. Indirekte bruk av et FITC-antistoff skjer når det brukes som et sekundært antistoff, bindes spesifikt til et primært antistoff. Når et FITC-konjugert antistoff blir anvendt direkte, tar merkingsprosedyren kortere tid, men merking er ikke så sterk. Indirekte merking tar et ekstra trinn, men signalet eller etiketten forsterkes fordi flere FITC-merket sekundære antistoffer kan feste til en enkeltstående primære antistoff.

Det er mange bruksområder for FITC antistoff i celle- og molekylærbiologi. Denne typen av antistoff kan anvendes alene eller i kombinasjon med andre monoklonale eller polyklonale antistoffer for å merke spesifikke proteiner i celler i en teknikk kjent som immunocytokjemi. FITC-antistoffer kan også bli anvendt i slike metoder som enzym og protein aktivitetsanalyser, flowcytometri, og Western blotting.

FITC konjugerte primære og sekundære antistoffer er allment tilgjengelig gjennom mange molekylærbiologi selskaper. Det er også mulig for laboratorier å forberede sine egne primære antistoffer og deretter bruke et kit å bøye FITC til dem. Noen selskaper vil ta lab forberedt primære antistoffer og bøye dem til FITC fluorokrom for en lab. FITC-konjugert sekundære antistoffer er ikke vanligvis laget av private forskningslaboratorier, og er vanligvis kjøpt fra selskaper som spesialiserer seg på produksjon av sekundære antistoffer.