Hva er et antistoff konjugert?

May 30  by Eliza

Et antistoff-konjugat er et merkemolekyl som kan benyttes ved histologiske eller enzymatiske antigenpåvisning assays for å lokalisere bundne antistoffer. Det fungerer ved å være fysisk koblet eller konjugert til antistoffet som blir brukt til å merke et antigen av interesse. Et antistoff som er kodet til et antistoff-konjugat er et verktøy som ofte anvendes i forskning for å identifisere enten den nøyaktige plassering eller mengden av proteiner eller antigener av interesse, mot hvilket antistoff eller antistoffer ble hevet.

Histologiske og proteomikk analyser ofte avhengige av antistoffer som reagens i forskning teknikker av hvilke spesifikke proteiner kan merkes. Ved å utsette et antigen eller protein av interesse til et antistoff som ble dannet mot den, kan antigener eller proteiner være merket. Ved å bruke et antistoff-konjugat - det vil si, et antistoff som er blitt konjugert til et spesifikt molekyl som brukes eller syntetisert for å være lett oppdages - antistoffer på de respektive antigenene kan så bli identifisert og analysert. Den vanligste typen av antistoff-konjugat er et fluorescerende molekyl, slik at for identifisering av antigener i vev under et fluorescerende mikroskop. Andre konjugater omfatter molekyler som pepperrotperoksidase, som brukes i konjugasjon med antistoffene for senere utvikling med diaminobenzidin (DAB).

Ofte primære antistoffer blir dannet mot spesifikke antigener, mens sekundære antistoffene vil bli konjugert til merking molekyler og dannet mot det primære antistoff. Som et eksempel kan man være interessert i å identifisere et antigen kalt Antigen X. En vil da bruke, for eksempel, et antistoff oppvokst i en mus som reagerer og pinner til Antigen X. For å være i stand til å finne hvor disse primære mus antistoffer har funnet og bundet til disse Antigen X-molekyler, et sekundært antistoff ville deretter anvendes - for eksempel en hevet i en geit - som vil bli merket med et konjugat som gjør denne sekundære antistoff kan påvises i enten enzymatisk eller fluorescerende mikroskopiske analyser. For analyser i lokaliserende antigener ved hjelp av et elektronmikroskop, blir gullpartikler ofte brukt som et antistoff-konjugat, fordi de kan detekteres ved hjelp av en elektronstråle.

Grunnen for å bruke primære og sekundære antistoffer, i stedet for å bruke et antistoff konjugering hvori det primære antistoff er direkte konjugert, er kostnadseffektivitet. Antistoffkonjugering er dyrt i form av tid og reagenser. Spesielt for uvanlig antigener, er antistoffkonjugering på primære antistoffer ikke verdt bekostning av produksjonen. Snarere, ved hjelp av antistoff konjugering på sekundære antistoffer, store mengder av et konjugert antistoff kan bli syntetisert på en gang og anvendes i analyser med en rekke primære antistoffer som er skreddersydd for å lokalisere mange forskjellige antigener, noe som gjør produksjonen verdig og kostnadseffektiv.

I noen tilfeller kan imidlertid et primært antistoff vil bli merket for å redusere støyen i deteksjonssignalet på grunn av økt ikke-spesifikk antistoffbinding som resulterer fra bruk av flere antistoffer. Mens denne dyre, svært sensitive analyser vil fortsatt kalle for denne metoden. Det er mulig å kjøpe sett som tillater en forsker å merke konjugater til sin egen antistoff av valg, noe som øker kostnadene av reagenset, men reduserer protokoll trinn og muligens øke signal-til-støyforhold i den endelige antistoffpåvisningsmetoden.