Hva er flowcytometrisystemer?

June 3  by Eliza

Strømningscytometri er studiet av enkeltceller som de passerer gjennom en væskestrøm. Komponenter av cellen, enten internt eller på overflaten, må det først bli merket med en eller flere fluoriserende fargestoffer. En laser inne i et instrument som kalles et flowcytometer eksiterer disse fluorescerende molekyler, slik at de sender ut lys ved ulike bølgelengder. Mengden av fluorescens kan gi en indikasjon med hensyn til hvor stor andel av forskjellige celletyper som er tilstede i prøven. Strømningscytometri er brukt i laboratorier for en rekke applikasjoner, inkludert kreftforskning, immunologi, og cellesyklusanalyse.

For å utføre strømningscytometri-analyse, må en suspensjon av enkeltceller farges med fluorescerende fargestoffer, som kan gjøres i enten en én-trinns eller to-trinns prosess. Cellulære proteiner blir ofte farget ved hjelp av antistoffer rettet mot proteinet av interesse. En ett-trinns prosess involverer fargings celler med antistoffer som allerede er merket med fluorescerende fargestoff. Hvis merkede antistoffer ikke er tilgjengelige, kan cellene bli farget først med et umerket primær antistoff, og deretter med en fluorescerende merket sekundært antistoff.

Når cellene er merket, er de klare for strømningscytometri-analyse. Et rør inneholdende suspensjonen av celler blir lastet på strømningscytometer. Cellene strømme gjennom instrumentet og passerer foran en laser i enkelt fil. Som laseren treffer hver celle, er lyset spredt i en forover eller sideretning. Forward scatter målinger gir en indikasjon på celle størrelse, mens sidespredning er et mål på detaljnivå av cellene.

Energien fra laseren eksiterer også fluorokromkonjugerte molekyler, fluorescerende fargestoff som brukes for å farge cellene. En vanlig laser anvendes for strømningscytometri er argon-ion-laser, som emitterer lys ved en bølgelengde på 488 nanometer (nm). Dette lyset eksiterer molekylene av det grønne fargestoff fluorescein, som så emitterer lys ved en bølgelengde på 525 nm. Fotomultiplikatorrør (PMTs) i strømningscytometer har lys filtre som detekterer lyset som sendes ut av de forskjellige fluorokromer. Instrumentet kan ha flere PMTs som gjenkjenner lys på forskjellige bølgelengder.

Red-diode, fiolett diode, eller He-Ne (helium-neon) er andre lasere som kan anvendes i et flowcytometer. Andre fluorokromer brukes i flowcytometri analyse inkluderer phycoerythrin, Texas rød, eller allofykocyanin. Ulike kombinasjoner av lasere og fluorokromer tillate forskeren å samle inn informasjon om mange ulike cellulære markører i samme eksperiment.

Programvare som er utviklet for bruk med strømningscytometer hjelpemidler forskeren i å visualisere dataene. Celle populasjoner er analysert ved hjelp av prikkplotter, tetthet tomter, eller histogram. Regioner kan trekkes rundt cellene av interesse og fluorescensintensitet kan gi en indikasjon på prosentandeler av forskjellige celler i prøven.