Hva er Gelelektroforese?

December 4  by Eliza

I gel-elektroforese, er en elektrisk strøm tilført til en gel matriks som inneholder prøver av DNA, RNA eller protein. Den elektriske strøm forårsaker at proteinet eller nukleinsyremolekyler til å bevege seg gjennom gelen, noe som muliggjør separasjon av molekyler av forskjellige størrelser. Denne teknikken brukes for å påvise eller isolere molekyler av en bestemt størrelse av en blanding av nukleinsyrer eller proteiner.

Det første trinnet i gelelektroforese protokollen er å plassere en blokk av gel i en liten holdetank. Gelen ble laget fra en forbindelse som danner et fast stoff ved romtemperatur, og har en nøytral ladning. Tanken som holder gelen blokken blir så fylt med nok av en spesiell gel elektroforese buffer løsning for fullstendig å dekke gelen.

I den ene enden av gel-blokken er en serie av små brønner. En liten mengde av et DNA- eller proteinprøve ble tilsatt til hver brønn. Hver enkelt brønn inneholder en eksperimentell prøve med en ukjent blanding av nukleinsyre eller protein. En ytterligere brønn inneholder en kontrollprøve med en blanding av nukleinsyre eller protein kjente størrelser. Hver prøve, inkludert kontrollen, er blitt blandet med et fargestoff for å identifisere plasseringen av prøvene etter at elektroforesen er fullført.

Når alt dette oppsettet arbeidet er avsluttet, er elektroforese initiert ved å bruke en elektrisk strøm til septiktanken der gelen ligger. Den elektriske strøm driver eksempelmolekylene gjennom gelen, med en hastighet som er proporsjonal med størrelsen av molekylet. Mindre molekyler reise gjennom gelen raskt, mens større de reise sakte. Som molekylene reise, skiller de seg på gelen i henhold til deres størrelse.

Når den fargede fargestoff når den annen ende av gelen, blir den elektriske strøm fjernet og gelen farget med en løsning som forbedrer fargen på fargestoff. Til slutt blir den gel "leses" ved å måle hvor mye hvert molekyl har reist i løpet av tiden tillatt for elektroforese. Denne informasjonen kan brukes til å beregne størrelsen av hvert molekyl i hver av prøvene.

Det finnes flere forskjellige typer av eksperimentelle teknikker som benytter elektroforese. I en Southern blot blir agarosegelelektroforese anvendt for å isolere fragmenter av DNA eller RNA. Western blot anvender polyakrylamid gel elektroforese for å isolere proteiner fra en blanding. Hver av disse teknikkene anvendes for å lete etter en viss forhåndsdefinert sekvens av nukleinsyre eller protein. Elektroforese og blotting teknikker er brukt i mange områder av biologisk forskning, så vel som i medisinske og rettsmedisinske fag.

  • I gel-elektroforese, er en elektrisk strøm tilført til en gel matriks som inneholder prøver av elementer som DNA.