Ribonukleinsyre (RNA) ekstraksjon er en laboratorieprosess som vanligvis anvendes i molekylærbiologisk forskning. Ved å isolere tilnærmingene av RNA, kan forskerne studere genetiske komponenter i en rekke organismer, fra bakterier til mennesker. Selv deoksyribonukleinsyre (DNA) er den mest vanlige nukleinsyre assosiert med genetisk forskning, er RNA forbindelsen mellom DNA og celle-proteiner som er ansvarlige for en rekke forskjellige strukturelle roller. Utvinning av RNA tillater forskere å studere veien fra DNA informasjon til proteinproduksjon og cellefunksjon.

Nukleinsyrer, i form av DNA og RNA, holder den genetiske informasjon som er nødvendig for celler å fungere og replikere. Ribonukleinsyre eller RNA, er koblingen mellom DNA og celleproteiner. Spesifikke typer RNA kopiere bestemte deler av DNA for å hjelpe til med dannelsen av slike proteiner. Følge stien mellom DNA og celle proteiner hjelper forskerne å forstå genregulering og proteinsyntese innen individuelle celler. Prosesser som fremmer RNA ekstraksjon og sikre prøve stabilitet gi forskere med et middel for å følge stien mellom DNA og RNA.

Under RNA-ekstraksjon, er biologiske prøver redusert og renset i en slik grad at RNA er isolert for senere undersøkelse. Molekylære komponenter, slik som proteiner, RNA og DNA, skillevegg eller isolere på forskjellige tidspunkter, slik at for utvinning av spesifikke typer av RNA. Ulike vev og celletyper krever ulike metoder for RNA ekstraksjon. Mens en rekke metoder finnes for å utføre RNA ekstraksjon, til den vanligste bruksområder sentrifuge blande biologiske prøver med ulike kjemiske forbindelser, kjent under samle denatureringsmidler.

En vanlig metode for RNA-ekstraksjon er fenol-kloroform-ekstraksjon, også kjent som PC eller PCIA. Ved hjelp av denne metoden, er vevsprøver blandet med like deler fenol og kloroform. Kjent som en bifasisk blanding blir oppløsningen sentrifugert i en denaturerende oppløsning. To faser resultere, med den første som den vandige fasen og den andre er den organiske fase. Det er i løpet av den vandige fase som RNA-ekstraksjon skjer, ved hjelp av etanolutfelling.

Andre fremgangsmåter for å ekstrahere RNA varierer, avhengig av prøvestørrelsen, vevstype, og enten helt eller delvis RNA er nødvendig. For gjær, plante, eller dyreprøver, komplett RNA, eller total eukaryote RNA, er prøvene trengs. Bakterier, på den annen side, krever total prokaryote RNA. Hver type RNA nødvendiggjør en annen metode for prøvepreparering, ekstraksjon, og lagring.

Komplikasjoner med RNA-ekstraksjon er vanlige og generelt relatert til degradering av RNA etter ekstraksjon. Ribonuklease enzymer som vanligvis finnes i vevsprøver forringer raskt RNA. Hvis det ikke brukes raskt, kan RNA degradering gjengi en prøve ubrukelig. Som svar, mange metoder for RNA ekstraksjon inkluderer skritt for utarbeidelse av prøver for lagring, både før og etter utvinning, for å redusere eller bremse nedbrytningen av RNA.

Denaturert alkohol er en endret form av etanol som er blitt gjort med hensikt usmakelig eller giftig. Hensikten bak å legge disse denaturerende stoffer til etanol er å hindre folk fra å konsumere det. Dette kan tillate en regjering å innkreve færre eller ingen skatt på rødsprit enn det gjør på etanol beregnet på konsum. Mange forskjellige midler kan anvendes for å denaturere alkohol, og hver regjering har sine egne regler om akseptable formler. En av de viktigste forutsetninger for å velge en denaturering middel er at det ikke bør være lett fjernes fra etanol.

Den etylalkohol som vanligvis brukes i alt fra munnvann til rengjøringsmidler er kjemisk identisk med den type alkohol som finnes i whisky, vodka, tequila og brennevin. Siden mange regjeringer stole på den tunge beskatning av disse åndene, denaturering litt alkohol for industri og husholdning bruk kan tillate selektiv beskatning av bare etanolen som er beregnet på konsum. Hvis denaturering prosessen ikke ble håndhevet, kunne folk kjøpe og forbruke billig, ren etanol som var ment for industriell bruk og omgå effektivt ulike brennevin lover og avgifter.

Hver regjering som krever denaturering av alkohol har sine egne retningslinjer som tjener til å regulere prosessen. I USA har staten rundt 100 forskjellige ingredienser som er tillatt i rødsprit i tillegg til ca 60 konkrete formler. Hver formel fastsetter typer av denaturerende midler som kan brukes i tillegg til de forhold som de trenger for å bli lagt i. Companies er ofte gitt en viss bredde i å velge hvilke autorisert denatureringsmiddel å bruke, som forskjellige produkter kan ha forskjellige krav.

En av de viktigste denatureringsmidler som vanligvis tilsettes til etanol er metylalkohol, og det er derfor uttrykket "denaturert sprit" brukes noen ganger. Metanol, som er laget av en rekke forskjellige utgangsmaterialer som tre og kull, er meget giftig. Det har også en tilsvarende kokepunkt til etanol, noe som gjør de to ånder vanskelige å separere når de har blitt blandet inn i en løsning. Andre denatureringsmidler er valgt for tilsvarende egenskaper, og det er vanligvis et krav at en denaturert alkoholproduktet ikke bør være lett reduseres til komponent ingrediensene gjennom prosesser som utfelling, destillering og væske-ekstraksjon. Noen land har også krav som denaturert alkohol bli farget lys blå eller lilla å redusere sannsynligheten for utilsiktet inntak.

• Den etylalkohol som vanligvis brukes i vaskemidler er kjemisk identisk med det som finnes i alkohol tequila.

Bisulfitt-sekvensering er en fremgangsmåte hvor forskjellige regioner av DNA analyseres ved hjelp av metylering. Metylering er prosessen med å legge et bestemt molekyl, kalt en metylgruppe, et nukleotid, i dette tilfelle vanligvis en cytosin. Inaktive nukleotider blir ofte denaturert, slik at denne metoden kan anvendes for en rekke formål, fra bestemme aktive regioner i et genom til å identifisere genet-rike regioner. I bisulfite sekvensering, er denaturert cytosines ikke berørt av sekvensering prosess, mens ikke-denaturert cytosines omdannes til uracil, en nukleotid vanligvis ikke finner i det genetiske materialet, deoksyribonukleinsyre (DNA).

Denne metoden er svært følsom for endringer i metylering, så små endringer i binding kan gi forskere spesifikk informasjon om bestemte nukleotider. Natriumbisulfitt omdanner cytosin til uracil, men omdannelsen skjer i et miljø hvor metylert cytosin ikke vil gjennomgå denne endringen. Når bisulfite sekvensering er fullført, har den opprinnelige DNA blitt omgjort til en signifikant forskjellig molekyl. Cytosines vil bli sterkt utarmet eller potensielt fraværende. Hvis en cytosin fremdeles befinner seg i dette konverterte molekyl, representerer det en naturlig metylert cytosin i genomet under vurdering.

Som alle eksperimentelle protokoller, har bisulfite sekvense ulemper. Den mest betydelige ulempe er at den krever en meget høy saltkonsentrasjon for å fungere ordentlig. Saltet oppmuntrer gløding av enkeltkjedet DNA i sin mer naturlig dobbeltspiralen, og natriumbisulfitt kan ikke alltid nå cytosines når de er en del av dobbelt-trådet DNA. Hvis saltkonsentrasjonen er for høy, kan en rekke cytosines ikke omdannes til uracil, noe som resulterer i falske identifikasjon av metylerte cytosines innen genomet. Denatureringsmidler kan være nødvendig å redusere antallet av falske positive identifikasjoner.

Store mengder av genomiske data er ikke nødvendig for bisulfitt-sekvensering, slik at fremgangsmåten har en nyttig anvendelse analysere kliniske prøver. Den opprinnelige nukleinsyre kilde spiller ingen rolle, men kilden må være DNA. I teorien kan ribonukleinsyre (RNA) bli sekvensert ved hjelp av denne metoden, siden de fleste RNA er enkelt strandet, og ville ikke være så utsatt for falske positiver på grunn av blokkerte nukleotider. Ved å sette ut i praksis, er imidlertid bisulfitt sekvense ikke nyttig for RNA, fordi RNA har naturligvis uracil i den. Uten noen form for ytre merking eller tillegg til protokollen, konverterte cytosines ville være umulig å skille fra naturlig uracil.

Når gjennomføre noen form for sekvense metodikk, nøyaktighet og presisjon er viktig. Sensitive metoder som bisulfite sekvense tilby en pålitelig middel for sekvensanalyse, som igjen tillater for genet analyse og identifisering av mål for narkotika og terapier. Selv om denne metoden ikke kan brukes på levende mennesker, kan det likevel være til stor hjelp med bare den minste av vevsprøver for å jobbe med.

• DNA er en kjemisk kjede som finnes naturlig i form av en dobbeltspiral.
• I bisulfite sekvensering, forskere bruker metylering å analysere ulike regioner av DNA.